原代細胞

簡(jiǎn)要描述：原代細胞是專(zhuān)業(yè)從事細胞生物學(xué)產(chǎn)品銷(xiāo)售的高科技企業(yè)。產(chǎn)品涵蓋人類(lèi)原代細胞、動(dòng)物原代細胞、細胞培養基、血清、干細胞、轉染試劑、細胞檢測試劑盒等細胞。

產(chǎn)品型號： XY-9009

所屬分類(lèi)：人原代細胞

更新時(shí)間：2024-12-31

                    原代細胞

原代細胞傳代方法：

一、貼壁細胞的消化法傳代

1、吸除或倒掉瓶?jì)扰f培養液。

2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動(dòng)培養瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中。

3、消化2-5分鐘后把培養瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察，發(fā)現原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)，棄去消化液，加入培養液終止消化。

4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個(gè)培養瓶中，置37℃培養箱中繼續培養。第二天觀(guān)察貼壁生長(cháng)情況。

二、懸浮細胞的傳代

1、直接傳代

1）讓?xiě)腋〖毎恋碓谄康缀?，將上清吸?/2-2/3。

2）用吸管吹打形成細胞懸液后，分別接種到另外兩到三個(gè)培養瓶中，置37℃培養箱中培養。

2、離心法傳代

1）將細胞連同培養液一并轉移到離心管內，離心800-1000rpm，5分鐘。

2）去除上清，加新的培養液一離心管內，用吸管吹打使之形成細胞懸液。

3）將細胞懸液分別接種到另外兩到三個(gè)培養瓶中，置37℃培養箱中培養。

原代細胞培養中的6個(gè)常見(jiàn)錯誤

錯誤＃1：一小管原代細胞在水浴中解凍一段時(shí)間

糾正＃1：原代細胞對解凍過(guò)程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴中，保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶，并轉移到無(wú)菌操作臺。確保您的培養瓶在解凍前已經(jīng)準備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養箱中。

錯誤＃2：解凍小瓶后直接離心原代細胞

糾正＃2：我們不建議在解凍后離心細胞，因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復原代細胞后的第二天更換培養基以去除任何殘留的DMSO。

錯誤＃3：允許原代細胞變得過(guò)于融合

糾正＃3：當生長(cháng)至100匯合時(shí)，原代細胞可以變得衰老。記住，原代細胞不是100純，因此重要的是盡量減少污染細胞的生長(cháng)。我們建議在細胞達到90-95％融合時(shí)，對原代細胞進(jìn)行傳代培養。

錯誤＃4：傳代原代細胞時(shí)過(guò)度胰蛋白酶消化

糾正＃4：當細胞傳代時(shí)，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后*中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。我們特別推薦專(zhuān)門(mén)為原代細胞配制的胰蛋白酶中和溶液，但也可以使用10％血清或大豆胰蛋白酶抑制劑。

錯誤＃5：原代細胞可以很容易地重新凍存

糾正＃5：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進(jìn)細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感，重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。

錯誤6：原代細胞可以無(wú)限的增殖

糾正＃6：與細胞系不同，原代細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進(jìn)行實(shí)驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個(gè)增值困難的細胞類(lèi)型，你應該密切監測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著(zhù)時(shí)間的推移，大量生長(cháng)從而成為主要細胞。