白介素2Elisa試劑盒實(shí)驗原理: 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中羊白細胞介素2(IL-2)水平。用純化的羊白細胞介素2(IL-2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素2(IL-2),再與HRP標記的白細胞介素2(IL-2)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素2(IL-2)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值),通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中羊白細胞介素2(IL-2)濃度。
白介素2Elisa試劑盒注意事項:
1.當混合蛋白溶液時(shí)應盡量輕緩,避免起泡。
2.洗滌過(guò)程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
3.一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn),做復孔。
5.如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高,請先稀釋后再測定,計算時(shí)請后乘以稀釋倍數。
6.在配制標準品、檢測溶液工作液時(shí),請以相應的稀釋液配制,不能混淆。
7.底物請避光保存。
8.不要用其它生產(chǎn)廠(chǎng)家的試劑替換試劑盒中的試劑。
白介素2Elisa試劑盒標本處理辦法:
實(shí)驗前應預測標本含量,如果標本濃度過(guò)高,應對標本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍,計算時(shí)再乘以相應的稀釋倍數。標本使用0.01mo/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
若所檢樣本不包含在說(shuō)明書(shū)所列樣本之中,建議進(jìn)行預實(shí)驗驗證其有效性,并注意留存樣本。
若樣本為細胞培養上清,因該類(lèi)樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測不出的情況。
使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會(huì )由于某些化學(xué)物質(zhì)的引|入導致ELISA實(shí)驗結果偏差。