原代細胞來(lái)源于活體或是新近死亡的供體,通過(guò)機械或酶方法解離獲得,其方案根據來(lái)源物種(例如人,小鼠)和所涉及的組織類(lèi)型而變化。通常包含以下步驟:組織切割和切碎,酶解,反復洗滌,研磨和微濾分餾,后重新懸浮和接種收集的細胞群。對于松散的、被纖維結締包圍的組織,機械均質(zhì)化可能足以進(jìn)行解離。如果您的組織來(lái)源是外周血,差速離心便可以分離目的細胞。
原代細胞培養的應用:
1、為研究生物體細胞的生長(cháng)、代謝、繁殖提供有力的手段;
2、為傳代培養創(chuàng )造條件;
3、服務(wù)于臨床實(shí)踐,用于藥物篩選等。
原代細胞培養之后分離需要注意的地方:
1、原代培養的分離細胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí),它們之間會(huì )互相影響,在這些細胞之間能產(chǎn)生一些促生長(cháng)的活性物質(zhì),使細胞彼此互相促進(jìn)存活和生長(cháng)。如果接種的細胞密度過(guò)低,細胞之間的促生長(cháng)作用很小,也很難使細胞適應從體內的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入獨立生存環(huán)境的變化過(guò)程。如果接種的細胞密度過(guò)大,會(huì )導致?tīng)I養物質(zhì)供應不足,代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。
2、適當增大原代培養接種的細胞密度,給培養的細胞提供更多的類(lèi)似于在體內時(shí)細胞之間的相互作用,會(huì )極大提高原代培養的細胞在體外存活率。待細胞適應體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養時(shí)再以較低的密度接種和培養。
3、盡快使接種的細胞貼壁,是決定培養能否成功的關(guān)鍵??梢栽诮臃N后先將培養瓶置培養箱內培養3h到5h,待細胞貼壁后,再補足培養液繼續培養。